بروسلوزBrucellosis و تست های تشخیصی آن
بروسلوزBrucellosis و تست های تشخیصی آن
یک بیماری عفونی است که توسط سویه های مختلف بروسل در گاو ، خوک ، گوسفند ، بز ، اسب ، سگ و انسان بروز پیدا می کند. انسان از طریق مصرف شیر و لبنیات آلوده و گوشت و فرآورده های آن به بیماری مبتلا میگردد که بیماری در انسان با درد شدید در ناحیه مفاصل ، تعرق بیش از حد ، تورم مفاصل و ... همراه میباشد. به علت خطرناک بودن بیماری برای انسان و همچنین قابلیت انتقال بیماری از دام به انسان جمعیت دامی کشور را تست کرده و موارد مثبت را کشتار میکنند . به منظور تست حیوان از نظر بیماری بروسلوز از آزمایشات سرولوژیکی همچون رزبنگال و رایت استفاده میشود.
آزمون های تشخیصی بروسلوز :
1. تست رزبنگال :
اساس تست رز بنگال آگلوتیناسیون مستقیم میباشد .
به منظور انجام تست رزبنگال ابتدا 50 میکرو لیتر سرم دام مشکوک به بروسلوز را به یکی از چاهک های پلیت ریخته و یک قطره انتی ژن رزبنگال ( صورتی رنگ ) را به ان اضافه می کنیم و سپس با اپیکاتور به صورت دایره وار مخلوط کرده و بعد در دستگاه شیکر shaker گذاشته تا به مدت 5 دقیقه کاملا مخلوط شود. در صورتیکه آنتی بادی ضد بروسلا در داخل سرم حیوان وجود داشته باشد با آنتی ژن رزبنگال واکنش داده و به صورت clumping نمودار خواهد شد که با چشم غیر مسلح قابل مشاهده است . و در صورت مشاهده آگلوتیناسون تست مثبت اعلام شده و دام باید کشتار گردد. این تست یک تست کیفی میباشد که فقط وجود یا عدم وجود بیماری را نشان میدهد.
2. تست رایت :
آزمون رایت بر اساس آگلوتیناسیون مستقیم است.آزمون رایت به دو روش اسلایدی و روش لوله ای انجام می شود.
· تست رایت به روش اسلایدی
ابتدا با یک پیپت 0.1 میلی لیتری بر روی یک اسلاید مناسب به ترتیب مقادیر 0.08و 0.04, 0.02, 0.01, 0.005,میلی لیتر از سرم بیمار را می ریزیم . از یک نمونه سرم مثبت و یک نمونه سرم منفی برای کنترول آگلوتیناسیون استفاده می کنیم . با استفاده از سمپلر 30 میکرولیتری آنتی ژن را به سرم موجود در چاهک ها اضافه کرده و پس از اضافه کردن آنتی ژن با استفاده از اپلیکاتور سرم و آنتی ژن را به صورت دورانی به هم مخلوط میکنیم . اسلاید را بر روی روتاتور قرار داده و بعد از گذشت 3 دقیقه نتایج را در زیر نور غیر مستقیم قرائت میکنیم .
هر یک از چاهک ها نشان دهنده یک تیتر خاصی میباشد که به حجم سرم وابسته است .به این صورت که حجم 0.08 تیتر 20/1 ، حجم 0.04 تیتر 40/1 ، حجم 0.02 تیتر 80/1 ، حجم 0.01 تیتر 160/1 و حجم 0.005 تیتر 320/1 را نشان میدهد .
با استفاده از روش اسلاید میتوان بیمار یا عدم بیماری را تشخیص داد که در صورت مثبت شدن حتما باید تیتر دقیق سرم را با استفاده از روش لوله ای تعیین کرد.
· تست رایت به روش لوله ای
به منظور انجام آزمایش رایت لوله ای ابتدا 11 عدد لوله آزمایش را در جا لوله ای قرار داده و در لوله اول 0.9 میلی لیتر و در لوله های بعدی 0.5 میلی لیتر سرم فیزیولوژی ریخته میشود . در مرحله بعد 0.1 میلی لیتر از سرم گرفته شده از خون حیوان را در لوله اول ریخته و خوب مخلوط میکنیم سپس از لوله اول 0.5 میلی لیتر برداشته و در لوله دوم میریزیم و بعد از مخلوط کردن 0.5 میلی لیتر از لوله دوم برداشته و به لوله سوم میریزیم و این کار را تا لوله دهم ادامه داده و 0.5 میلی لیتر لوله دهم را دور میریزیم . لوله یازدهم به عنوان کنترل آنتی ژن بوده و فاقد سرم میباشد. در مرحله بعد به تمام لوله ها 0.5 میلی لیتر آنتی ژن اضافه میکنیم . و پس از مخلوط کردن لوله ها را با دور 2500 به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ میکنیم و نتایج آگلوتیناسیون را در لوله ها بررسی میکنیم که لوله اول تیتر 20/1 لوله دوم تیتر 40/1 لوله سوم تیتر 80/1 لوله چهارم تیتر 160/1 لوله پنجم تیتر 320/1 لوله ششم تیتر 640/1 لوله هفتم تیتر 1280/1 و ... را نشان میدهند.
در صورت مثبت بودن آلودگی دام به بروسلوز در گاو اندامهای آلوده را باید ضبط کرد و در مورد گوسفند و بز ابتدا آزمایشات میکروبی انجام داده و بعد تصمیم می گیریم . اگر میکروب در لاشه موجود بود لاشه باید حذف شود.
